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血液基因組大量提取試劑盒 
血液基因組大量提取試劑盒
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英文名稱 : 血液基因組大量提取試劑盒
貨號 : EY01P1017
規格 : 50次/100次
品牌 : 上海一研
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包裝與品牌:

產品名稱規格品牌
血液基因組大量提取試劑盒50次/100次     一研


產品介紹:             


產品說明

本產品可用于全血樣本的基因組DNA的純化。純化原理是首先利用紅細胞裂解液先去除血液中的紅細胞*,細胞裂解液裂解細胞核釋放基因組DNA,由硅膠膜柱可逆吸附體系內的基因組DNA,經蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白質、脂質等雜質后,用純化液洗脫獲得基因組DNA。本產品適用于未凝固全血,以及經各種抗凝劑(EDTA、肝素、檸檬酸)處理過的全血樣本。一次可從5-10 ml全血中提取到30-200 μg高純度基因組DNA(OD260/OD280 =1.7-1.9),此基因組DNA可直接用于PCR、酶切等后續實驗。

*本產品不能從全血中直接提取DNA,要去除血液中紅細胞后才能得到高濃度的基因組DNA。如要直接從全血迅速提取高純度基因組DNA,建議選擇Quick血液基因組DNA提取試劑盒(貨號:N1131、N1132)。

質量控制

純化的基因組DNA質量通過限制性酶切和單拷基因的PCR擴增鑒定。

保存條件

蛋白酶K于-20℃保存。

其余試劑置于室溫(15-25℃)干燥條件下保存1年。

如果消化緩沖液DS和MS中沉淀,可在55℃加熱溶解,待恢復室溫后混勻即可使用。不會影響基因組DNA的純化效率。

操作步驟

1   取血液樣本,每5-10 ml血液加入到一只50 ml離心管中。加入2倍體積的紅細胞裂解液RS。漩渦振蕩或上下來回顛倒混勻。5,000 rpm離心3min,棄上清,收集白色或淡紅色沉淀,重復上訴步驟。

● 如沉淀仍然呈深紅色,表明紅細胞裂解不充分,可再加等體積紅細胞裂解液RS處理一次。

● 對于哺乳動物全血,每5-10 ml全血中可提取30-200 μg的基因組DNA。如從鳥類、兩棲類或更低級的動物血液中提取基因組DNA,因其血液中紅細胞有細胞核,血液用量勿超過500 μl/離心管。每500 μl全血中可提取200 μg的基因組DNA。

2   加入5 ml消化緩沖液DS,漩渦振蕩至形成完全均一的懸浮液。

● 如需去除RNA,可加入100 μl RNase A(100 mg/ml),振蕩15秒,室溫放置5min。

3   加入500 μl蛋白酶K和5.5 ml裂解液MS,漩渦振蕩混勻。65℃溫浴15 min。溶液應變清亮,簡短離心以去除管蓋內壁的水珠。

● 加入裂解液MS時可能會產生白色沉淀,一般65℃放置時會消失,不會影響后續實驗。如溶液未變清亮,說明細胞裂解不徹底,可能導致提取DNA量少和提取出的DNA 不純。

4   加入5.5 ml無水乙醇,上下顛倒混勻。此時可能出現絮狀沉淀。簡短離心以去除管蓋內壁的水珠。將溶液及絮狀沉淀轉移到純化柱中。12,000rpm離心1min,棄濾液。

● 此時基因組DNA被吸附于DNA純化柱中的硅膠膜上。

5   加入10 ml去蛋白液PS。12,000 rpm離心1min,棄濾液。

● 此步驟的作用是去除硅膠膜上吸附的蛋白、脂質等雜質,以獲得高質量基因組DNA。

6   加入10 ml漂洗液PE。12,000 rpm離心1min,棄濾液。

● 漂洗液PE初次使用前用無水乙醇按1: 3稀釋,即含75%乙醇。

7   加入10 ml漂洗液PE。12,000 rpm離心1min,棄濾液。

8   12,000 rpm離心3min,以徹底去除純化柱中殘留的液體。

● 此步驟的作用是去除殘留乙醇,避免影響后續的酶促反應(PCR或酶切)。同時利于基因組DNA充分溶解。

9   將純化柱置于新的1.5 ml離心管中。向純化柱中央處,懸空滴加30-100μl洗脫液TE。室溫放置2min。

10   12,000 rpm離心2min,管底即為高純度基因組DNA。-20℃保存。

● 洗脫液TE可用去離子水代替,但其pH需為8.0-8.5。

● 對洗脫液TE 60℃預熱,會提高基因組DNA的產量。

注意事項:

  ● RNA樣本保存液如出現沉淀,37℃加熱振蕩混勻。

  ● 加入RNA樣本保存液后,樣本不能立即置于-20℃或-80℃,要先4℃置放過夜,待組織充分浸潤后再置于低溫保存。

  ● 樣品浸沒在RNA樣本保存液中,可在37℃保存1天,25℃保存1周,4℃保存1個月,-20℃長期保存;使用時請注意保存時限。

  ● 保存在RNA樣本保存液中的樣本可不經特殊處理,離心或直接使用和新鮮組織一樣的RNA提取方法提取RNA。

  ● RNA樣本保存液可以配合各種常見的RNA提取試劑盒使用,如東盛、invitrogen、omega等公司出品的RNA提取試劑盒,不影響試劑盒操作,不影響提取所得RNA質量及其后續實驗。



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