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豬腸道杯狀病毒RT-LAMP試劑盒反應五要素

發表時間:2021-10-12 16:36

豬腸道杯狀病毒RT-LAMP試劑盒反應五要素:


參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+


引物: 引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。

    QQ圖片20180928170231.jpg

設計引物應遵循以下原則:


①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。


②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。


③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。


④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3’端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。


⑤引物3’端的堿基,特別是zui末及倒數*個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。


⑥引物中有或能加上合適的酶切位點,被擴增的靶序列zui有適宜的酶切位點,這對酶切分析或分子克隆很有好處。


⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。

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